全能核酸酶使用说明书
(产品货号:EM109)
概 述:
全能核酸酶(Benzonase)是来自Serratia marcescens,经基因工程改造的核酸内切酶。能降解所有的DNA(包括单链,双链,线性和环状)和RNA而不会使蛋白降解,具有很高的特异性。
用 途:
全能核酸酶可将核酸消化成3-5个碱基长度(杂交限度以下)的5'-单磷酸寡核苷酸;能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中的核酸污染,且没有蛋白酶残留。除此之外,它还可以减少样品处理时间,提高蛋白产量,使离心过程中上清和沉淀分离得更彻底,便于溶液超滤,以及提高色谱纯化效率等;后续可通过色谱纯化去除该核酸酶(其pI:6.85,SDS-PAGE下表观分子量为30 KDa)。
产品组分:
组 分
25,000U
100,000U
全能核酸酶(250U/μL )
100ul
400ul
10×Buffer 2.0
100ul
400ul
储存溶液:
20 mM Tris-HCl pH 8.0 @ 25℃,2 mM MgCl2,50 mM NaCl,50 %甘油。
10×Buffer 2.0:
200 mM Tris-HCl pH 8.0 @ 25℃,20 mM MgCl2,20 mM NaCl,0.5 % Tween 20。
产品作用条件:
全能核酸酶在广泛的条件下(6 M urea,0.1 M Guanidine, 0.4 % Ttiton,0.1 % SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF)都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性。能够与多种细胞裂解液(如RIPA),或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂兼容。以下为全能核酸酶可耐受的部分条件参数。
条件参数
最适条件
可作用条件范围
Mg2+
1-2 mM
1-10 mM
pH
8.0-9.2
6-10
温度
37℃
0-42℃
DTT
0-100 mM
>100 mM
β-巯基乙醇
0-100 mM
>100 mM
一价阳离子(如Na+,K+)
0-20 mM
0-150 mM
PO43-
0-10 mM
0-100 mM
注:最适条件下全能核酸酶活力≥90 %;可作用条件全能核酸酶活力≥15 %。
活性单位定义:
一个酶活单位(U)定义为:在37 ℃,pH 8.0 反应条件下,30min内△A260值下降1.0(即消化37 μg 鲑鱼精DNA)所需的酶量定义为一个活性单位。
应 用:
1)重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,全能核酸酶可以去除核酸污染,有效降低样品粘度,便于下游操作。
2)在细胞或细菌裂解液中加入全能核酸酶,可去除粗提物中的核酸,降低溶液粘度,从而增加蛋白产量。
3)减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象。
4)有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强二维电泳分辨率。
5)去除疫苗(蛋白质类)和病毒样品制备中的DNA污染。
保存条件:
-20℃可保存2年。
使用注意事项:
当样品为含有大量蛋白、细胞壁和其他盐分的粗制品时,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需增加酶的用量。
产品性能:
经SDS-PAGE验证,全能核酸酶纯度≥95%。
详见说明书:全能核酸酶使用说明书