Cod UNG（热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶）

（产品货号：EM105）

UNG酶概述：Cod UNG是重组大西洋鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶，是一种用于分子生物学研究和诊断的具有热不稳定特性的酶。该酶的关键特征是在低温下有较高活性，热处理之后能够快速，完整，不可逆的失活。与其他可用的UNG酶相比，Cod UNG在热灭活后不会重新激活，因此既能够解决PCR残留污染问题又不会降解后续产物，这使得PCR产物的下游使用成为可能。

Cod UNG水解DNA中脱氧核糖和尿嘧啶碱基之间的N-糖苷键并在DNA中留下嘧啶位点，而对RNA中的尿嘧啶没有活性。

用途：

来源于鳕鱼Atlantic Cod的热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶（UNG）在55℃条件下5 min即完全不可逆地失去活性。因此PCR扩增前，在PCR混合液中添加Cod UNG，25℃ 10 min即可消除PCR产物的残留，接下来的PCR循环中94℃变性便可将其灭活，不会影响新的含dU PCR产物的产生。

• 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基

• 去除PCR残存污染

特点：

• 热不稳定
• 完全不可逆地失活
• 在qRT-PCR和qPCR中具有很高的应用优势
• PCR后不会降解PCR产物
• 不含核酸酶污染，纯度高

产品规格：

货号	组分	100 U	500 U
EM105	Cod UNG（1 U/μl）	100μl	500μl

储存溶液：

酶贮存于：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.1% Triton X-100， 50 %甘油， pH7.5 @ 25℃。

反应Buffer：

Cod UNG与绝大多数的PCR聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在离子浓度>100 mM的条件下活性会受到抑制。

活性定义：

在标准反应体系下，37℃ 1min催化60 pmol尿嘧啶从含尿嘧啶的双链DNA上释放所需要的酶量为一个活性单位。

来源：

来自于E.coli菌株；应用基因重组技术将Atlantic Cod-DNA糖基化酶基因在E.coli菌株中进行表达纯化获得的重组蛋白。

保存条件：

-20℃保存，避免反复冻融。

热失活：

55℃灭活5分钟。

使用注意事项：

Cod UNG在高离子浓度条件下活性会受到抑制。

Cod UNG在qRT-PCR中的使用：

在qRT-PCR中使用Cod UNG进行污染控制的前提条件是该酶具有足够的热不稳定，在55℃能够快速失活。Cod UNG有利于在qPCR和qRT-PCR分析中使用，每单位Cod UNG可以去除超过106个拷贝的污染DNA，而不会影响检测的灵敏度（Ct）。快速的热灭活和在低温下的高活性特性使得Cod UNG在扩增反应之前仅在室温下孵育5分钟即可。

灵敏度测试实验结果

图1.以1 ng总RNA为模板进行qRT-PCR。Cod UNG 25℃预温育5分钟，55℃逆转录10min，总反应体积为25μl。反应体系中加入不同量的Cod UNG对Ct值没有影响。

完全且不可逆的热灭活使得Cod UNG非常适合任何qPCR和qRT-PCR反应，在这些应用中产物需要保持完整以便进一步分析，例如克隆，测序或使用单核苷酸引物延伸技术进行基因分型。当样品必须在扩增后长时间保存时也是十分有利的。

详见说明书：Cod UNG 酶使用说明书