导读

在癌症精准医学中，灵敏且高效地检测耐药突变是必不可少的。急性髓细胞性白血病（Acute myeloid leukemia，AML）是髓系造血干/祖细胞恶性疾病，以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。

在治疗AML中，FLT3耐药基因中的F691L突变对目前所有可用FLT3抑制剂表现出普遍的耐药性。然而，截至该研究之前，还没有针对FLT3-F691L的特殊检测方法。

在本研究中，Xinjie Wang和Fuling Zhou的研究团队等借助由先达基因研发的ERA 超增技术（酶促恒温扩增技术），为临床诊断耐药FLT3-F691L突变提供了一种很有前景的方法。

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研究内容

目前针对FLT3基因F691L位点突变的检测方法中，常用的第一代测序(FGS)方法灵敏度低，第二代测序(NGS)耗时较长。为此，Xinjie Wang和Fuling Zhou的研究团队等建立了一种准确、灵敏的CRISPR检测FLT3基因F691L位点的方法。研究团队将前处理的样本在核酸释放剂中，95℃孵育3min以释放基因组DNA，然后采用先达基因的ERA超增技术扩增基因组DNA的FLT3基因F691L区域。用L691-crRNA诱导Cas12a反应检测上述ERA扩增产物，37℃、15min后即在485 nm蓝光下可直接观察结果。通过对稀释质粒和120例AML患者样本的检测证实，该检测方法可以达到0.1%的灵敏度，并在40分钟内完成整个诊断过程。这种方法将会在急性髓系白血病治疗应用和指导中发挥重要作用。

研究结论

本研究建立了一种高效、准确、灵敏的检测Flt3-F691L的方法。该方法基于ERA和Cas12荧光法，均在37℃下进行，不需要大型设备和昂贵的试剂。该方法可以实现对 DNA模板个位数拷贝的检测。Xinjie Wang和Fuling Zhou的研究团队等针对急性髓系白血病FLT3基因F691L突变的临床诊断提供了一种很有前途的方法。该方法将在AML治疗的早期筛查、护理点和治疗选择中发挥重要作用。

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原文：《Rapid and Sensitive Diagnosis of Drug-Resistant FLT3-F691L Mutation by CRISPR Detection（IF:6.113）》

作者：Yin Liu, Yanling Chen, Shisheng Huang, Xiaodong Ma, Xingxu Huang, Xinjie Wang and Fuling Zhou

期刊：Frontiers in Molecular Biosciences